PCR實(shí)驗室建設四要素

　　1 試劑準備區

　　用于試驗試劑的準備。該區域為正壓，目的是防止污染物質(zhì)溢入。該區域內部又可分為3個(gè)區域：普通提取試劑的準備區、PCR試劑準備區和PCR主反應液準備區。在普通提取試劑的準備區內準備一些樣品核酸提取時(shí)所需的裂解液、提取液等;PCR試劑準備區用于PCR試劑的制備和保存。例如準備引物、探針等PCR試劑。為了防止交叉污染，避免反復冷凍和解凍，試劑存貯溶液應該被平均為小的工作體積，儲存在這個(gè)房間以備后用：PCR主反應液準備區將進(jìn)行主反應混合液(除了樣品。所有PCR所需試劑的混合)添加到PCR管的操作。重要提示：不能將其它房間的材料(包括擴增、模板和目標核酸或陽(yáng)性對照、供應品、或設備)帶進(jìn)試劑準備區。

　　2 樣品準備區

　　該區域無(wú)壓力設置要求。該區域是用于對樣品進(jìn)行分樣，將樣品進(jìn)行研磨、粉碎、勻漿的區域。由于在這些粉碎、研磨和勻漿處理過(guò)程中會(huì )產(chǎn)生氣溶膠，因此，存在陽(yáng)性樣品污染后續操作的可能性。該區域與后面的區域應嚴格隔離，應放在與后面的三個(gè)區域隔開(kāi)的獨立的房間中。在樣品準備區內還可設立一個(gè)專(zhuān)用的封閉區或房間用于樣品的接收和儲存。這個(gè)房間可以放置冰箱用于樣品儲存，應該和樣品準備區其它區域隔離開(kāi)。樣品準備區域的人員不得進(jìn)入試劑準備區。

　　3 核酸提取區

　　核酸提取區是進(jìn)行樣品核酸提取的區域。該區域為負壓，目的是防止核酸溢出造成污染。樣品準備區又包括從樣品中進(jìn)行核酸提取和純化的區域以及將核酸加到包含PCR主反應混合液管中的操作區域。添加完樣品后，PCR管的蓋子要盡可能快地蓋好。使用PCR板和膠蓋時(shí)，陽(yáng)性對照和含目標序列的樣品要與待測樣本分開(kāi)操作，以避免模板添加時(shí)造成交叉污染。

　　4 擴增和產(chǎn)品檢測區

　　該區域是用來(lái)進(jìn)行PCR擴增和PCR分析的。PER儀放置在這個(gè)區域。房間保持負壓，目的是防止核酸溢出。在該區域人員一定要一直穿戴工作服和手套，在離開(kāi)房間前脫去，防止擴增子污染其它地點(diǎn)。所有用于擴增和產(chǎn)品檢測的設備要用于這個(gè)房間。PCR分析]二作也設置在該區域。實(shí)驗室應盡可能把這些活動(dòng)分隔在不同區域或不同房間。以降低擴增產(chǎn)物的污染風(fēng)險。如果沒(méi)有條件在該區域設立負壓，此區域必須建立排風(fēng)裝置。

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